无法观察到人类染色体标本制备实验报告的原因
一、实验步骤和控制措施
1.标本采集、接种和培养:
对患者采血部位进行常规消毒，用5mL一次性无菌注射器或采血针采集血液约3mL，注射5mL无菌肝素锂抗凝管，倒置混匀。加强门诊和住院部标本采集人员的培训。标本必须无菌采集，以避免溶血和凝血。
在生物安全柜中，用一次性无菌注射器(2.5mL)抽取抗凝剂，接种于培养瓶(含5mL人外周血淋巴细胞培养液)，每瓶0.4mL，至少接种两瓶。接种后，轻轻水平摇动几次，混匀。在37±0.5℃的两个培养箱中直立66 ~ 72小时，第二天观察培养液有无凝固、溶血或细菌生长。所有用于细胞培养和细胞学处理的培养液和试剂必须经过预先检验，新的一批试剂到货后必须进行批间验证。
2.细胞收获和生产:
培养结束前，在生物安全柜中的培养基中加入秋水仙碱，秋水仙碱的终浓度为0.1~0.5μg/mL，轻轻摇匀，置于37±0.5℃的培养箱中处理1.5h，秋水仙碱处理后，小心地从培养箱中取出培养瓶，用吸管将培养物吸入离心管中，离心:1500r/m×65438+弃去上清液，加入8 ~ 10ml 37℃孵育的0.075mol/L KCl低渗溶液，用吸管吹成细胞悬液，置于37℃水浴中25分钟。在每个离心管中加入1.5mL卡诺固定液(甲醇:乙酸3:1)，轻轻吸吹，室温静置10min。离心机:1500转/米×10分钟，弃去上清液。然后在离心管中加入8mL卡诺固定液，立即用吸管吹成单细胞悬液，室温放置30min，离心:1500r/m×10min，弃去上清液，如此反复3次。秋水仙碱处理时间过长，有许多分裂细胞和短染色体；反之，则少而细长。这两种情况都不适合观察形态和计数，要准确把握秋水仙碱的浓度和时间。低渗使红细胞膜破裂，淋巴细胞肿胀，低渗治疗的浓度和时间要适当。但混合细胞固定后一定要轻，否则会造成细胞破裂和染色体丢失。
将0.2~0.5 mL新鲜固定液滴入离心管中，用吸管将淋巴细胞团轻轻吹成细胞悬液，从冰箱中取出冰片，每片加入2~3滴悬液，75℃烘烤2 ~ 3小时。载玻片一定要冰浴清洗，否则染色体分散不好。在制作过程中，如发现细胞不肿胀，细胞膜不破裂，染色体成簇，无法拉伸，可延长固定时间数小时或适当增加冰醋酸比例。
3.捆扎和染色
将50毫升pH值为7.4的1/15M磷酸盐缓冲液倒入立式染缸中，加入0.5毫升2.5%胰蛋白酶溶液，混匀。胰酶消化后，用10%吉姆萨染液染色3min，然后用镊子取出载玻片，用自来水轻轻冲洗两面，再用电吹风吹干。每次胶带显影都要做实验前处理，以确定正确的胶带显影时间，不能盲目处理所有载玻片。判断显带效果，要多观察长度适中的分裂相，不能仅凭1和2分裂相的显带效果来决定下一次显带时间。
二，培训失败的原因分析
就2015而言，到目前为止，有1500份标本，10份标本培养生产后不能用于染色体分析。外周血染色体的制备是一个手工项目，过程复杂，每个环节都要严格控制。这个房间的工作人员都经过严格的培训，考试合格后才能上岗。这些10不合格标本的原因已全部排除为操作人员失误所致。实验室的设施和环境都符合实验要求。所以我们对这6位患者进行了电话回访，发现* * *的一个共同特点就是使用了消炎药，尤其是儿科住院患者。
抗生素可能抑制淋巴细胞转化，影响培养质量。对于这部分患者，我们建议停药后至少两周再次抽血。有4例患者采血培养后淋巴细胞计数增高，可用于染色体分析，均有报道。1患者再次采血后仍无有效分裂相，电话告知仍在服用中药消炎药。仍有5名患者尚未复查。
三。纠正和预防措施
对于外周血染色体制备失败的情况，我们先排除人为误差和实验室设施环境的影响，再考虑是否是同等条件下病例本身的原因。因此采取的纠正措施是:告知患者标本培养不合格，原因可能与使用消炎药有关。建议停药至少两周再抽血。
目前我们实验室在采集标本前总是会询问患者的病史，所以可以通过询问是否使用消炎药来防止培养失败率。我告诉过你染色体检查不是急件，可以停药后再检查。
总之，要想制备好染色体标本进行核型分析，细胞培养、制作、显带的每一步都不可忽视。需要在操作过程中不断总结经验，才能提高外周血染色体标本制备的成功率。
遗传组杨莉/文
急性淋巴细胞白血病检测项目总结
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