液体制备培训问题
贴点东西给你看看。如果还是不懂，拍个照片发到丁香园bbs上问问~
常见的污染如下:
1.细菌:在普通倒置显微镜下，细菌呈黑色细沙状，根据感染细菌的不同可有不同的形状，培养基一般会变浑浊、变黄，对细胞生长有明显影响。
仔细检查器皿的灭菌情况，看高压灭菌时是否有足够的时间和压力放气！尤其是移液管等与储存培养液接触的物品，如果连续污染两次，可能会造成储存液污染，一定要注意！下次使用前检查培养液是否浑浊！
可以在培养液中加入相应的抗生素进行处理。
2.霉菌:培养液清澈，倒置显微镜下无杂质。37度孵育2-3天，仍为澄清，但出现絮状杂质。显微镜下可见丝状漂浮物，可见明显菌丝。细胞还能生长，但是时间长了，细胞的活力就变差了。
用硫酸铜溶液擦拭CO2培养箱，然后在水托盘中加入饱和硫酸铜，或在培养箱的托盘中加入饱和灭菌磷酸氢二钠高盐液，防止霉菌污染。
3.支原体:黑色，好像多为多态。一般培养基会浑浊，感染支原体。国内很多血清都没有检测出支原体阴性，而支原体是牛血清中最常见的微生物之一。此外，它不能通过过滤除去。支原体感染细胞后，细胞病变不明显，只是慢慢死亡。
治疗支原体病的兽药泰乐菌素可用于细胞培养，无任何不良反应。适马公司使用时，在50ug/ml泰乐菌素培养液中培养6天或连续传代2代，即可消除支原体污染。如果作为常用抗生素，建议使用8ug/ml。
4.刺槐:可穿透滤膜或通过空气传播。在低倍镜下，它是黑点。高倍镜下可以看到黑色的虫子在周围游动，培养基也不浑浊，一般不会影响太大。这些细胞仍然可以使用。往往细胞生长状态良好，观察到的运动动物没有明显增加，培养基的颜色和透明度没有明显变化。在同一批血清中培养的细胞中可以发现类似的现象。对细胞生长状态无明显影响，细胞旺盛增殖后自然消失，除更换血清外，无需特殊处理。建议如果细胞有可能被这样污染，可以增加种子板的密度，提高细胞的存活率。
5.真菌:一般培养基清澈不变色，显微镜下有丝状体。有些真菌刚开始很像死亡的细胞碎片，但是很多小碎片很清晰，像珊瑚，不像细胞碎片，慢慢长成细小的黑色细丝。真菌生长缓慢，不像细菌那么容易被发现，但一旦被发现，细胞就被污染了，很难保存。
6.原生动物:培养基可略混浊。显微镜下，有很多微小的点，稍有活动。细胞虽能生长，但繁殖速度明显减慢，细胞状态不佳，边缘不清，细胞不透明。它们可以与细胞一起生长，但会与细胞竞争营养。这种生长很常见，但是它们数量少，细胞站有优势，所以不会影响细胞的正常生长。
可能的污染原因:可能的原因有很多，比如液体制剂的消毒、操作问题、环境问题等等。
关于培养基的无菌条件，取培养基于培养瓶中(不加细胞)，37度试培养一段时间后观察。如果没有细菌生长，那就是操作的问题。
也可以预先在培养基中加入双抗体(硫酸链霉素和氨苄青霉素)。但双抗体有时会影响细胞的状态，因此在转染和检测细胞的某些指标前，有必要去除双抗体，以免影响实验结果。